人GDNF-TAT真核表达载体的构建及其在毕赤酵母中的表达

• 作者: 宋海峰 赵巧香 马忠辉 高新
• 来源期刊: 军事医学科学院院刊
• 学科: 生物学
• 关键词: 胶质细胞源性神经营养因子 GDNF-TAT基因 电转化 毕赤酵母 血脑屏障 聚合酶链反应
• 年，卷（期）: 2009,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 427-430
• 页数: 4页
• 分类号: Q78
• 字数: 3250字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-9960.2009.05.008

摘要

目的:在毕赤酵母中表达带有TAT多肽的人胶质细胞源性神经营养因子(glial cell line-derived neurotrophic factor, GDNF),为探讨GDNF-TAT用于帕金森病的治疗奠定基础.方法:用密码子优化法合成人GDNF基因序列连在pPICZαA,用PCR方法分别在上游引入TAT位点与XbaⅠ酶切位点,下游设计扩增pPICZαA上的α-因子序列.然后插入pPICZαA载体中,转化大肠杆菌TOP10,筛选阳性克隆,对其进行PCR和双酶切并测序鉴定,构建GDNF-TAT在毕赤酵母表达质粒pPICZαA-GDNF-TAT.电击转化毕赤酵母GS115,对阳性克隆进行诱导表达后经SDS-PAGE和Western印迹鉴定目的蛋白.结果:双酶切pPICZαA-GDNF-TAT后,琼脂糖电泳可分别见到大小约为3.1 kb和432 bp片段,表明目的片段已插入载体中,经序列测定其含有完整的GDNF-TAT基因片段,Western 印迹结果显示含有pPICZαA-GDNF-TAT的毕赤酵母GS115能分泌表达GDNF-TAT.结论:成功构建了毕赤酵母表达载体pPICZαA-GDNF-TAT,并能在毕赤酵母GS115中分泌表达GDNF-TAT.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	宋海峰	军事医学科学院放射与辐射医学研究所	66	327	9.0	15.0
2	高新	军事医学科学院放射与辐射医学研究所	25	142	7.0	10.0
3	马忠辉	军事医学科学院放射与辐射医学研究所	3	10	1.0	3.0
7	赵巧香	黑龙江八一农垦大学动物科技学院	7	33	4.0	5.0