香蕉束顶病毒海口分离物NSP基因的原核表达

• 作者: 冯团诚 刘志昕 王健华
• 来源期刊: 热带作物学报
• 学科: 农学
• 关键词: 香蕉束顶病毒 Gateway重组技术 NSP 原核表达
• 年，卷（期）: 2009,（9）
• 所属期刊栏目: 作物病虫害及其防治
• 页码范围: 1345-1350
• 页数: 6页
• 分类号: S668.1|S432.41|Q785
• 字数: 5162字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-2561.2009.09.023

摘要

应用PCR方法从感染香蕉束顶病毒的香蕉植株幼嫩假茎和叶片总DNA中克隆NSP (Nuclear shuttle protein)基因的编码区,并通过Gateway技术定向重组到原核表达载体pDEST~(TM)-17中的6xHis标签下游,经菌落PCR和测序鉴定结果表明,成功构建了原核表达载体pDEST~(TM)-17-NSP.阳性克隆转化Ecoli BL21(DE3),经IFFG诱导表达、SDS-PAGE分析和western blot检测,结果显示,融合蛋白以包涵体的形式稳定表达,分子量约为20 ku,与预计值相符.通过诱导条件的优化,确定了最佳的融合蛋白表达条件为25℃、0.1 mmol/L IPTG条件下诱导4h.从而为制备NSP多克隆抗体和进一步研究NSP的功能奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王健华	中国热带农业科学院热带生物技术研究所农业部热带作物生物技术重点开放实验室	37	201	8.0	13.0
2	刘志昕	中国热带农业科学院热带生物技术研究所农业部热带作物生物技术重点开放实验室	84	567	13.0	19.0
3	冯团诚	中国热带农业科学院热带生物技术研究所农业部热带作物生物技术重点开放实验室	6	29	3.0	5.0