小分子G蛋白Rapl shRNA表达载体的构建和鉴定

• 作者: 叶启发 蒋圣军 贺爱兰 郑霞
• 来源期刊: 生命科学研究
• 学科: 医学
• 关键词: Rap1 siRNA shRNA 小鼠肝细胞
• 年，卷（期）: 2009,（2）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 142-145
• 页数: 4页
• 分类号: R394
• 字数: 2879字
• 语种: 中文

摘要

应用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术抑制Rapl基因的表达,构建Rap1 shRNA(small hairpin RNA,shRNA)表达载体,观察其对小鼠肝脏细胞中Rap1 mRNA和蛋白表达的干扰作用.根据小鼠Rap1 mRNA的全序列.设计了3种Rap1 siRNA序列(Rap1 siRNA1、Rap1 siRNA2、Rap1 siRNA3)和阴性对照序列(HK);采用克隆技术,将其插入带有报告基因绿色荧光(ECFP)的pGenesil-3栽体,构建Rap1 shRNA表达载体:经双酶切和测序证实Rap1 siRNA表达载体克隆构建成功,插入片段测序结果与合成的siRNA结果一致;昆明小鼠40只,体重18～20 g,随机分成4组: Ⅰ组(转染HK组)、Ⅱ组(转染Rapl shRNAl组)、Ⅲ组(转染Rap1 shRNA2组)、Ⅳ组(转染Rapl shRNA3组).于0、16、24 h腹腔内注射Rapl shRNA 2.0～2.5 mg/kg(用PBS稀释至1 mL);48 h后收集小鼠肝脏.用显微荧光、定量RT-PCT、免疫组化检测小鼠肝细胞中Rap1shRNA的转染率、Rap1基因表达以及蛋白质表达水平.Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组、Ⅳ组小鼠肝脏细胞体内转染率均大于60%,Ⅱ组、Ⅲ组、Ⅳ组的Rap1 mRNA表达、Rap1蛋白表达均降低,其中Rap1 shRNA1干扰效果最佳.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	叶启发	中南大学湘雅三医院卫生部器官移植中心	115	495	11.0	15.0
2	贺爱兰	湖南人文科技学院生命科学系	14	28	3.0	4.0
3	郑霞	荆州市中心医院妇产科	1	3	1.0	1.0