梅花鹿Col X基因的RNAi重组慢病毒载体的构建及鉴定

• 作者: 刘国庆 李春义 杨福合 褚文辉 赵海平 邢秀梅
• 来源期刊: 中国农业大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: 鹿茸 角柄 ColX基因 RNAi 慢病毒载体 微粒体培养
• 年，卷（期）: 2009,（4）
• 所属期刊栏目: 生物科学
• 页码范围: 29-34
• 页数: 6页
• 分类号: Q782|S865.42
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1007-4333.2009.04.005

摘要

研究十型胶原蛋白(Collagen type X,Col X),在软骨内成骨过程中所起的作用.本研究针对梅花鹿ColX基因设计筛选2条高分RNAi靶序列,在T4 DNA连接酶的作用下分别与慢病毒载体质粒plvthm连接,形成重组质粒S2-plvthm/S3-plvthm;PCR筛选阳性克隆并测序鉴定.用Lipofectamine 2000介导S2-plvthm/S3-plvthm,pCMVdr8.91,pMD2G三质粒共转染293T细胞.结果显示:转染24 h后,观察到表达荧光蛋白的293T细胞.收集培养液后进行1 000 g离心5 min,所得上清液含有重组慢病毒的组分.S2-plvthm/S3-plvthm上清液中病毒滴度分别达到9.96×107TU/L和7.18×107TU/L.以此病毒感染梅花鹿角柄骨膜细胞,并进行微粒体培养,72 h后出现肉眼可见的白色微团,该细胞团有荧光表达.本试验成功地构建了针对梅花鹿Col X基因的慢病毒裁体,为了研究Col X蛋白在鹿茸角骨化中的作用奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘国庆	北京大学医学部	39	229	9.0	13.0