利用ATP扩增反应与生物发光法结合检测微量微生物

• 作者: 周国华 朱术会 邹秉杰 陈颖 马寅姣
• 来源期刊: 微生物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: ATP扩增反应 腺苷酸激酶 多聚磷酸盐激酶 生物发光检测
• 年，卷（期）: 2009,（6）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 826-830
• 页数: 5页
• 分类号: Q93.3
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0001-6209.2009.06.019

摘要

[目的]腺苷酸激酶(adenvlate kinase,ADK)和多聚磷酸盐激酶(polyphosphate kinase,PPK)偶联催化的ATP扩增反应结合生物发光检测法能够对微量微生物进行检测.但是PPK当中结合的内源性的ADP会产生背景干扰,影响测定.本文旨在融合表达ADK和PPK,并建立一种方便有效的内源性ADP的去除方法,降低背景,使之与传统生物发光法结合,实现高灵敏生物发光法检测微量ATP及微生物.[方法]PCR扩增得到PPK、ADK基因,插入表达载体pET28a(+)中构建重组表达质粒pET28a(+)-PPKADK,表达PPK-ADK融合蛋白.利用表面包裹聚胺醇(Polyurethane)的磁珠(magnetic beads),通过化学反应将腺苷酸双磷酸酶(apvrase)固定于磁珠表面,制备固相腺苷酸双磷酸酶(Beads-apyrase),用于除去与融合蛋白结合的内源性ADP,降低ATP扩增反应的背景,从而使之与生物发光反应相结合,测定微量外源ATP及细菌菌落数.[结果]表达的融合蛋白具有PPK和ADK的活性,利用Beads-apvrase可以方便而有效的去除内源性ADP,显著地降低反应背景,从而实现了利用ATP扩增反应与传统生物发光反应结合,测定了小于1 fmol的外源微量ATP,使生物发光法检测ATP及微生物的灵敏度提高至少100倍.[结论]利用Beads-apyrase能够方便、有效地降低PPK-ADK中的ADP背景,从而使PPK-ADK催化的ArrP扩增反应能够与传统生物发光法相结合,极大地提高了生物发光法的灵敏度.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	马寅姣	中国药科大学生命科学与技术学院	7	36	4.0	6.0
2	周国华	中国药科大学生命科学与技术学院	42	681	10.0	25.0
8	陈颖	中国药科大学生命科学与技术学院	13	154	9.0	12.0
9	邹秉杰	中国药科大学生命科学与技术学院	7	43	4.0	6.0
16	朱术会	中国药科大学生命科学与技术学院	3	19	3.0	3.0