斜纹夜蛾普通气味结合蛋白Ⅰ cDNA的克隆及在原核细胞中的表达

• 作者: 任顺祥 董小林 许小霞 金丰良
• 来源期刊: 中国农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 斜纹夜蛾 触角 气味结合蛋白 基因克隆 原核表达
• 年，卷（期）: 2009,（3）
• 所属期刊栏目: 植物保护
• 页码范围: 891-899
• 页数: 9页
• 分类号: S4
• 语种: 中文
• DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2009.03.017

摘要

[目的]克隆、序列分析和原核表达编码斜纹夜蛾(Spodoptera litura)GOBPⅠ(S1GOBPⅠ)的cDNA.[方法]采用同源克隆结合RACE的方法克隆S1GOBPⅠ基因的cDNA序列,并在pET-32a/BL21(DE3)系统中进行原核表达.[结果]从斜纹夜蛾触角中克隆了GOBPⅠ的cDNA序列(GenBank登录号为EU086372),序列分析表明,S1GOBPⅠ开放阅读框序列为495 bp,编码164个氨基酸,分子量为19.3 kD,等电点为5.54.S1GOBPⅠ具有昆虫气味结合蛋白的典型特征,即氨基酸序列中具有6个半胱氨酸残基,呈酸性.S1GOBPⅠ氨基酸序列与鳞翅目昆虫的气味结合蛋白氨基酸序列具有较高的相似性,表明S1GOBPⅠ属于GOBP家族.将S1GORPⅠ编码序列,克隆到表达载体pET-32 a上,构建原核表达载体pET-SIGOBPⅠ,在表达宿主菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导成功表达了相对分子质量为32.0 kD的可洛性融合蛋白,利用Ni2+-NTA亲和柱一步纯化了S1GOBPⅠ融合蛋白,以此融合蛋白免疫新西兰大白兔制备了S1GOBPⅠ的抗血清,ELISA滴度为1:5 000,Western印迹检测结果显示,S160BPⅠ抗血清与表达的融合蛋白质呈阳性反应,表明所表达的融合蛋白保持原有的免疫原性.[结论]克隆、分析和表达了编码斜纹夜蛾气味结合蛋白GOBPⅠ cDNA序列,为今后深入研究斜纹夜蛾GOBPⅠ基因的结构和功能奠定了基础.