猪日本脑炎病毒NS3基因实时RT-LAMP快速检测方法的建立

• 作者: 曾碧健 林志雄 田纯见 罗琼 罗长保 陈茹 鱼海琼
• 来源期刊: 动物医学进展
• 学科: 农学
• 关键词: 日本脑炎病毒 环介导逆转录等温扩增 快速检测 荧光定量
• 年，卷（期）: 2009,（12）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 34-39
• 页数: 6页
• 分类号: S852.659.6
• 字数: 4686字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-5038.2009.12.009

摘要

建立日本脑炎病毒一步法实时环介导逆转录等温快速扩增方法.根据日本脑炎病毒序列保守的非结构区基因NS3设计4条特异引物,用于扩增SA14-14-2株、SA103株和GD06株日本脑炎病毒获得成功,在病毒感染的单层细胞和猪体内都可以检出病毒.与常规SYBR GreenI适时荧光RT-PCR方法比较和Ct值分析,用不同稀释度病毒RNA,两者敏感性相似,适时RT-PCR在模板浓度低时结果更稳定.FIP和BIP纯度会影响反应效果,反应时间和模板浓度会影响电泳条带.一般63 ℃~65 ℃ 30 min可出现结果,模板浓度低时要适当延长反应时间.以SYBR GreenI为指示剂,RT-LAMP在63 ℃~65 ℃循环扩增检测日本脑炎病毒,1.5 min/循环,30个循环,Ct值为21.5.提示RT-LAMP方法用于日本脑炎诊断、鉴别,是敏感、可靠、成本低廉的方法,有助于人畜日本脑炎的防控工作.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	林志雄	广东出入境检验检疫局检验检疫技术中心	35	164	8.0	10.0
2	陈茹	广东出入境检验检疫局检验检疫技术中心	25	163	8.0	11.0
3	曾碧健	广东出入境检验检疫局检验检疫技术中心	9	63	5.0	7.0
4	田纯见	广东出入境检验检疫局检验检疫技术中心	9	49	5.0	6.0
5	罗长保	广东出入境检验检疫局检验检疫技术中心	8	51	5.0	7.0
6	罗琼	广东出入境检验检疫局检验检疫技术中心	7	48	5.0	6.0
7	鱼海琼	广东出入境检验检疫局检验检疫技术中心	10	43	4.0	6.0