鸭MHCⅡα基因的表达纯化与抗体制备

• 作者: 张舒婕 彭秀丽 杨庆磊 杨桓 胡福利 邓干臻 龚炎长
• 来源期刊: 中国兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 鸭 MHCⅡα基因 克隆 原核表达 纯化 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2009,（4）
• 所属期刊栏目: 基础兽医学
• 页码范围: 464-467
• 页数: 4页
• 分类号: S852.2
• 字数: 2861字
• 语种: 中文

摘要

根据NCBI上已发表的序列自行设计引物,通过RT-PCR从北京鸭脾脏的总RNA中扩增得到鸭MHCⅡα基因,将其克隆至pMD18-T,经酶切分析及序列测定鉴定后,进一步亚克隆至原核表达载体pET-28a.转化大肠杆菌BL21中诱导表达.电洗脱纯化蛋白,用于免疫昆明小鼠制备多克隆抗体.结果表明:克隆了鸭MHCⅡα基因,大小为633 bp,经核苷酸测序与已登录的基因序列同源性为99%;成功构建了原核表达载体,融合蛋白得到了高效表达且纯化后纯度可达90%,制备的鼠抗鸭MHCⅡα多克隆抗体经酶联免疫吸附试验(ELISA)与免疫印迹法(Western-blot)证实了抗体的效价高、特异性强,研究结果为研究鸭MHCⅡ分子奠定了基础.