rAAV2/1-Acrp30病毒的纯化、扩增与活性检测

• 作者: 李强翔 李果 欧阳石 王敏 谭华清 钟惠菊 龙国祥
• 来源期刊: 中华微生物学和免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: rAAV2/1-Acrp30 扩增 活性检测
• 年，卷（期）: 2009,（7）
• 所属期刊栏目: 病毒学
• 页码范围: 618-622
• 页数: 5页
• 分类号: R3
• 字数: 3659字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0254-5101.2009.07.010

摘要

目的 将大鼠脂联素基因(Acrp30)克隆到腺相关病毒(AAV)载体中,经包装、纯化、扩增后获得rAAV2/1-Aerp30病毒,并进行活性检测.方法 筛选阳性克隆获得pSNAV2.0-Acrp30,EcoR Ⅰ/Sal Ⅰ双酶切鉴定,并行测序.转染BHK21细胞,G418筛选培养,获得抗药克隆细胞株.HSV1-re/△UL2感染,包装此细胞株并收获病毒载体rAAV2/1-Acrp30.行DNA斑点杂交法测定病毒滴度,SDS-PAGE分析判断病毒纯度,Western blot法检测目的 蛋白脂联素在HEK293细胞中的表达活性.结果 PCR电泳及酶切鉴定表明,pSNAV2.0-Acrp30重组成功,基因测序显示装入pSNAV2.0质粒中的Acrp30基因正确.rAAV2/1-Acrp30病毒的大致滴度为1.0×1012μg/ml,HEK293细胞分泌蛋白浓度为50 ng/ml,病毒载体纯度在95%以上.结论 实验获得的脂联素病毒载体滴度高、感染性好,可试用于GK(Goto-Kakizaki)大鼠脂联素转基因治疗.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	钟惠菊		54	284	11.0	14.0
2	王敏		175	1039	16.0	24.0
3	龙国祥		6	24	3.0	4.0
4	谭华清		22	82	5.0	8.0
5	李果		21	174	9.0	13.0
6	欧阳石		2	26	2.0	2.0