麦长管蚜嗅觉相关蛋白Gqα基因的克隆及真核表达

• 作者: 孙京瑞 程登发 范佳 陈巨莲
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 麦长管蚜 嗅觉相关蛋白 G蛋白α亚基q类蛋白(Gqα) 基因克隆 杆状病毒表达系统
• 年，卷（期）: 2009,（1）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 78-83
• 页数: 6页
• 分类号: S188
• 字数: 4840字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2009.01.014

摘要

根据已报道无脊椎动物嗅觉相关蛋白Gqoα的氨基酸序列保守区设计简并引物,以麦长管蚜(Sitobion avenae)有翅成蚜cDNA为模板,结合RT-PCR及RACE技术扩增编码麦长管蚜Gqα蛋白的cDNA序列,其cDNA序列开放阅读框长为1 062 bp,编码352个氨基酸,预测蛋白分子量为40.8 kD,与GenBank多个物种Gqα cDNA序列及氨基酸序列均有很高相似性(≥82.17%)(GenBank登录号为EF638906),并具有Gα亚基q类蛋白的典型特征.利用TOPO及Gateway技术,通过体外重组反应,构建苜蓿丫纹夜蛾核型多角体杆状病毒(Autographa californica nuclear polyhedrosis virus,AcMNPV)重组病毒.将N端融合了V5-His6标记的V5-His6Gqot序列整合到AcMNPV病毒基因组DNA中,得到具有独立转染活性的重组杆状病毒.转染粉纹夜蛾(Trichoplusia ni)离体细胞系Tn-581-4(Tn细胞),进行Gqα蛋白的真核表达.SDS-PAGE检测到预期分子量约42kD的蛋白带,Westem blot检测到表达产物.表明含有6个组氨酸标签及V5抗体结合位点的Gqα融合蛋白V5-His6Gqα在昆虫离体细胞系中成功地表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	程登发	中国农业科学院植物保护研究所植物病虫害生物学国家重点实验室	91	1668	24.0	35.0
2	孙京瑞	中国农业科学院植物保护研究所植物病虫害生物学国家重点实验室	34	850	17.0	29.0
3	陈巨莲	中国农业科学院植物保护研究所植物病虫害生物学国家重点实验室	41	986	18.0	31.0
4	范佳	中国农业科学院植物保护研究所植物病虫害生物学国家重点实验室	6	56	4.0	6.0