变形链球菌ComE蛋白在大肠杆菌中的高效表达与纯化

• 作者: 刘筱娣 彭磊 郭丽宏
• 来源期刊: 实用口腔医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 变形链球菌 原核表达 蛋白纯化 密度感应
• 年，卷（期）: 2009,（2）
• 所属期刊栏目: 基础医学研究
• 页码范围: 157-162
• 页数: 6页
• 分类号: R780.2
• 字数: 5472字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-3733.2009.02.01

摘要

目的:构建变形链球菌comE基因原核表达载体,诱导ComE 融合蛋白高效表达,获取高质量的ComE 融合蛋白.方法:提取变形链球菌基因组,PCR 扩增得到变形链球菌comE基因片段,BamH Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切后定向克隆到pET28a(+) 表达载体中,并转化入E. Coli BL21(DE3).IPTG 诱导融合蛋白表达,Western blot 鉴定表达产物.进行蛋白表达的可溶性鉴定,并优化诱导时菌液的A600值、IPTG 浓度、诱导时间和温度4 个表达条件.然后用优化的条件大量诱导表达ComE 融合蛋白,采用镍柱和分子筛两步法进行纯化.结果:经PCR、双酶切反应以及测序鉴定,重组质粒中的插入序列为comE基因的全长片段(753 bp),无碱基的突变与读码框架的偏移.Western blot 证实表达产物确为6×His-ComE 融合蛋白,相对分子质量约为33 000.目的蛋白在上清和沉淀中均有表达,且当A600 为0.4 时,加入IPTG 至终浓度0.10 mmol/L,37 ℃诱导4 h后表达量最大.结论:成功构建pET28a(+)-comE 原核表达载体,用优化后的6×His-ComE 融合蛋白在E. Coli BL21(DE3) 中的表达条件,获得纯化的变形链球菌ComE 融合蛋白.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	郭丽宏	北京大学口腔医学院生物教研室	18	121	7.0	10.0
2	彭磊	北京大学口腔医学院生物教研室	3	4	1.0	2.0
3	刘筱娣	北京大学口腔医学院生物教研室	7	25	3.0	4.0