变形链球菌葡聚糖结合蛋白C基因特异片段的克隆和在大肠杆菌中的表达

• 作者: 吴补领 孙叶芳 孙汉堂 杨聚才 蒲勤 郭希民
• 来源期刊: 临床口腔医学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 变形链球菌 葡聚糖结合蛋白 克隆 原核表达
• 年，卷（期）: 2006,（9）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 537-539
• 页数: 3页
• 分类号: Q786
• 字数: 2649字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1003-1634.2006.09.010

摘要

目的:克隆变形链球菌葡聚糖结合蛋白C基因(Glucan-binding protein C gene,gbpC)编码序列的特异片段,并在大肠杆菌中实现原核表达.方法:根据gbpC序列设计并合成一对寡核苷酸引物,PCR扩增位于gbpC编码序列1342 bp～1794 bp间的一段特异片段,扩增产物经回收、酶切后,定向插入克隆载体puc18中,连接产物转化感受态大肠杆菌DH5α,挑选阳性克隆,鉴定后进行序列测定.将克隆获得的约0.45 kb的gbpC基因特异片段经EcoRI/SalI双酶切后,定向插入pGEX-4T-1中,构建pGEX-4T-1/gbpCE原核融合表达载体,转化感受态大肠杆菌DH5α,挑选阳性克隆,酶切及PCR鉴定后,异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(Isopropy1-β-D-thiogalactoside,IPTG)诱导表达融合蛋白GST-GbpCE,SDS-PAGE检测表达产物.结果:测序结果与Sato等报道的序列一致;原核表达后,在SDS-PAGE凝胶上出现一条新生蛋白条带,其相对分子量约43000,与预计大小相符合.结论:成功克隆并表达gbpC特异片段,获得了融合蛋白GST-GbpCE,为制备GbpC抗体打下了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨聚才	第四军医大学口腔医学院检验科	38	378	11.0	18.0
2	孙叶芳	第四军医大学口腔医学院牙体牙髓病科	16	58	4.0	7.0
3	吴补领	第四军医大学口腔医学院牙体牙髓病科	165	756	13.0	17.0
4	蒲勤	第四军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室	25	219	8.0	14.0
5	孙汉堂	第四军医大学口腔医学院牙体牙髓病科	25	99	6.0	9.0
6	郭希民	第四军医大学口腔医学院牙体牙髓病科	10	56	3.0	7.0