携带变形链球菌表面蛋白、葡聚糖结合蛋白及信号肽基因的真核表达质粒的构建

• 作者: 刘建国 杨德琴 柴巧学
• 来源期刊: 广东牙病防治
• 学科: 医学
• 关键词: 变形链球菌 表面蛋白抗原 葡聚糖结合蛋白 真核表达质粒 基因疫苗
• 年，卷（期）: 2011,（4）
• 所属期刊栏目: 基础与应用研究
• 页码范围: 181-185
• 分类号: R394
• 语种: 中文

摘要

目的 通过构建带有变形链球菌表面蛋白SpaP的P区、葡聚糖结合蛋白A葡聚糖结合区(glucan binding domain,GBD)及一段信号肽基因的嵌和体真核表达质粒pSSG,为基因疫苗的制备提供实验基础.方法 通过PCR扩增,获得分别编码SpaP的P区和GBD的两个基因片段sp和gg,以及人白介素2信号肽基因(signal).将它们分别定向插入pMD20-T克隆载体中,转化感受态大肠杆菌DH5α,挑取阳性克隆,初步鉴定后测序.将获得的3个基因片段分别双酶切,胶回收纯化后将同样进行双酶切的pVAX1质粒在T4 DNA连接酶作用下进行连接反应,获得真核表达质粒pSSG,并转化DH5α,提取纯化pSSG,进行质粒RCR,酶切电泳鉴定并测序.结果 真核表达质粒pSSG构建正确,目的 基因sp、gg和signal 定向插入至真核表达载体.结论 真核表达质粒pSSG包含了SpaP的P区和GBD以及人白介素2信号肽的编码基因,为基因疫苗研究奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘建国		128	653	13.0	17.0
2	杨德琴		37	249	9.0	13.0