以GPT和GFP为双重筛选标记的禽痘病毒转移载体的构建及鉴定

• 作者: 冉多良 夏俊 姜永萍 李俊辉 王艳丽 裴磊 陈化兰
• 来源期刊: 中国预防兽医学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 重组禽痘病毒 绿色荧光蛋白 黄嘌呤鸟嘌呤磷酸转移酶 HA基因
• 年，卷（期）: 2009,（7）
• 所属期刊栏目: 病毒及其病原生物学
• 页码范围: 501-504
• 页数: 4页
• 分类号: Q782
• 字数: 2726字
• 语种: 中文

摘要

为研制和开发以禽痘病毒为载体的重组病毒疫苗,本研究构建了禽痘病毒通用转移载体pSY681-gfp-gpt,该载体含有gfp和gpt2种报告基因及背对的痘苗病毒晚期启动子P11和早期启动子P7.5,P11启动gfp和gpt两个基因,P7.5用于启动外源基因,在早期启动子P7.5下游引入NotⅡ和AftⅡ两个酶切位点.用于外源基因的插入.为检测禽痘病毒转移载体pSY681-gfp-gpt的有效性,将H9亚型禽流感病毒A/Chicken/Shanghai/10/01(H9N2)的HA基因插入到该载体中构建转移载体pSY681-gfp-gpt-HA9,将转移载体转染已感染禽痘病毒S-FPV-017的鸡胚成纤维细胞,利用gfp和gpt同时进行双重筛选、数轮蚀斑纯化后获得了重组病毒rFPV-gpt-gfp-HA9,通过PCR、western blot鉴定,结果证明,获得了能稳定表达H9亚型禽流感病毒HA蛋白的重组禽痘病毒rFPV-gpt-gfp-HA9,为今后重组禽痘病毒活载体疫苗的研制奠定了基础.