parp10基因RNA干扰有效靶点的筛选及验证

• 作者: 于孟斌 周晓巍 张莹莹 李朝 杨予涛 王荣 黄培堂
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: RNA干扰 PARP10 G418
• 年，卷（期）: 2009,（2）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 169-172
• 页数: 4页
• 分类号: Q78
• 字数: 3516字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2009.02.006

摘要

目的:合成并筛选有效抑制parp10表达的siRNA.方法:根据parp10 cDNA序列,设计并合成prap10基因潜在的RNA干扰(RNAi)片段,将合成的寡核苷酸序列构建到pEGFP-C1H1U6载体中;通过双萤光素酶试验、Western blotting筛选有效的干扰序列;进一步用G418对A549细胞进行耐受度筛选,确定最低耐受度;用G418溶液对转染RNAi重组质粒的A549细胞进行筛选,通过RT-PCR鉴定干扰效果.结果:针对617 bp处所构建的RNAi载体能够抑制PARP10的表达,用浓度为400 μg/mL G418的McCoy′s 5A培养基筛选转染后的细胞,获得了能够表达绿色荧光标签蛋白的A549细胞株,经RT-PCR检测发现,PARP10表达受到抑制.结论:获得了能够有效抑制PARP10表达的特异性小干扰RNA(siRNA),为进一步研究其生物学功能提供了条件.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	黄培堂	军事医学科学院生物工程研究所	190	1493	20.0	30.0
2	周晓巍	军事医学科学院生物工程研究所	43	220	8.0	13.0
3	王荣	军事医学科学院生物工程研究所	5	3	1.0	1.0
4	于孟斌	军事医学科学院生物工程研究所	4	11	2.0	3.0
6	张莹莹	军事医学科学院生物工程研究所	8	38	4.0	6.0
7	李朝	军事医学科学院生物工程研究所	9	58	4.0	7.0
10	杨予涛	军事医学科学院生物工程研究所	1	0	0.0	0.0