基于重组猪囊虫18 ku抗原的间接ELISA方法的建立

• 作者: 刘石泉 吴国华 张少华 才学鹏 景志忠 贾万忠 郑亚东 骆学农
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪囊尾蚴 18 ku蛋白 大肠杆菌 表达 重组蛋白ELISA
• 年，卷（期）: 2009,（12）
• 所属期刊栏目: 预防兽医
• 页码范围: 1788-1793
• 页数: 6页
• 分类号: S852.734
• 字数: 5289字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0366-6964.2009.12.013

摘要

利用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)从猪囊尾蚴中克隆到18 ku蛋白基因,将扩增产物与pGEM-T Easy载体连接后测序分析.将目的基因亚克隆至表达载体,构建重组质粒pGEX-CE18,经转化大肠杆菌BL21 (DE3)后诱导表达,用SDS-PAGE和Western-blot分析表达产物.表达的目的蛋白纯化后作抗原建立检测猪囊虫抗体的重组蛋白间接ELISA方法.结果表明,18 ku蛋白基因在大肠杆菌中成功表达,表达产物约为35 ku的融合蛋白,并能被猪囊虫感染血清识别.经薄层扫描分析,表达量占菌体蛋白总量的28%.与商品化ELISA试剂盒平行检测178份阳性血清样品,二者的符合率为98.83%,说明建立的重组蛋白ELISA方法可用于猪囊虫病的诊断.