濒危药用植物厚朴ISSR引物筛选及反应条件的优化

• 作者: 于华会 杨志玲 杨旭 舒枭 谭梓峰
• 来源期刊: 生态学杂志
• 学科: 农学
• 关键词: 厚朴 正交设计 引物筛选 ISSR
• 年，卷（期）: 2009,（12）
• 页码范围: 2444-2451
• 分类号: S718.46
• 语种: 中文

摘要

以厚朴DNA为模板,利用正交试验分别对影响厚朴ISSR-PCR反应的Taq酶浓度、dNTP浓度、引物浓度、Mg~(2+)浓度、模板DNA浓度进行了优化,并通过梯度PCR确定不同引物的最佳退火温度和循环次数,最终确定厚朴最佳反应体系及扩增条件为:25μl 体系,其中包括1.5 mmol·L~(-1) MgCl_2,0.3 μmol·L~(-1)引物,0.04 U·μl~(-1)Taq 酶,0.2 mmol·L~(-1) dNTP,4 ng·μl~(-1)模板DNA,1 × Buffer;扩增程序:94℃预变性5 min,94℃变性30 s,50℃～60℃(退火温度随引物不同而定)退火45 s,72℃延伸90 s,共40个循环,然后72℃延伸8 min,4℃终止反应.此外,还利用优化的反应体系成功筛选出21条ISSR引物,并利用部分引物对厚朴个体进行了遗传多样性分析.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨旭	中国林业科学研究院亚热带林业研究所	46	580	15.0	22.0
2	杨志玲	中国林业科学研究院亚热带林业研究所	50	724	17.0	24.0
3	谭梓峰	中国林业科学研究院亚热带林业研究所	13	254	10.0	13.0
4	舒枭		11	281	10.0	11.0
5	于华会	中国林业科学研究院亚热带林业研究所	13	249	9.0	13.0