Notch1-NICD胞内结构域真核表达载体的构建及其初步功能分析

• 作者: 刘红涛 巩天晓 薛乐勋 许培荣 鲁照明
• 来源期刊: 郑州大学学报(医学版)
• 学科: 医学
• 关键词: Notch1信号途径 食管鳞状细胞癌细胞 细胞增殖 真核表达载体
• 年，卷（期）: 2009,（3）
• 所属期刊栏目: 食管癌研究
• 页码范围: 468-472
• 页数: 5页
• 分类号: R735.1
• 字数: 2940字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-6825.2009.03.003

摘要

目的:构建包含Notch1胞内结构域的Notch1-NICD真核表达载体及绿色荧光蛋白载体并转染食管鳞状细胞癌细胞株EC9706及Eca109,并对Notch1-NICD1在食管鳞状细胞癌中的功能进行初步探索.方法:根据Gen-Bank上的Notch1-NICD序列设计扩增引物,由RT-PCR扩增NICD片段,测序鉴定,并通过Blast进行序列比对,然后回收目的片段并与真核表达载体pcDNA3.1(+)相连,构建Notch1-NICD真核表达载体pNotch1-NICD1,同时将扩增的NICD与pEGFP-C1载体相连构建绿色荧光蛋白表达载体pENotch1-NICD1,并转染EC9706及Eca109,观察Notch1在细胞巾的定位及其途径的激活状态.同时将pNotch1-NICD1真核表达载体转染EC9706及Eca109,用MTT法分别在24 h、48 h、72 h、96 h及120 h观察外源性Notch1片段的导入对EC9706及Eca109细胞增殖的影响.结果:通过RT-PCR获得1个Notch1胞内区片段,并成功构建了包含Notch1胞内区结构域的绿色荧光蛋白载体及真核表达载体.转染pENotch1-NICD1后,Notch1在胞质和胞核内均有表达,表明Notch1信号通路被激活.此外,MTT结果表明转染Notch1-NICD1片段的食管鳞状细胞癌细胞的增殖受到明显抑制(P<0.05).结论:成功构建了Notch1绿色荧光蛋白表达载体及pcDNA3.1(+)真核表达载体.外源Notch1片段的引入能够明显抑制食管鳞状细胞癌细胞的增殖,提示Notch1基因有可能成为治疗食管鳞状细胞癌的一个潜在的分子靶点.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	薛乐勋	郑州大学第一附属医院细胞生物学研究室	140	1187	18.0	26.0
5	刘红涛	郑州大学生物工程系细胞生物学研究室	60	431	11.0	18.0
6	许培荣	郑州大学生物工程系细胞生物学研究室	40	265	11.0	15.0
7	鲁照明	郑州大学第一附属医院细胞生物学研究室	29	112	6.0	9.0
8	巩天晓	郑州大学第一附属医院细胞生物学研究室	7	16	3.0	3.0