人PAX8与PPARγ的融合基因(PPFP)的克隆及其重组质粒的构建

• 作者: 刘剑鸣 李劲东 李新营 李萃 段朝军 汤参娥 王志明
• 来源期刊: 中国普通外科杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 甲状腺肿瘤 PAX8/PPARγ 融合基因 重组质粒 腺癌 滤泡性
• 年，卷（期）: 2009,（11）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1149-1155
• 分类号: R736.1
• 语种: 中文

摘要

目的 探讨人PAX8/FPARγ融合基因(PPFP)表达质粒在甲状腺上皮细胞中的表达及作用.方法 从含有PAX8基因和PPARγ基因的质粒克隆模板PAX8-pOTB7及PPARγ-pCMV-SPORT6中,利用PCR方法 调取目的 基因PAX8和PPARγ,将PAX8和PPARγ定向连接后克隆到pEGFP-C1载体上,构建融合基因的真核表达质粒pEGFP-C1-PAX8/PPARγ,在大肠杆菌E.coli DH5α中转化并提取质粒,通过PCR和测序、分析比对验证PPFP融合基因后,将真核表达载体pEGFP-C1-PAX8/PPARγ的质粒用脂质体包合并转染人正常甲状腺上皮细胞Nthy ori 3-1,通过RT-PCR和Western blot鉴定PPFP融合基因于靶细胞内在mRNA和蛋白水平上的表达.结果 构建的质粒通过鉴定证实正确;该质粒转染人正常甲状腺上皮细胞Nthy ori 3-1后,经验证显示PPFP融合基因在mRNA和蛋白水平上顺利表达.结论 成功克隆了PPFP融合基因并构建其重组质粒pEGFP-C1-PAX8/PPARγ;该质粒转染人正常甲状腺上皮细胞Nthy ori 3-1后可顺利表达PPFP蛋白,为进一步研究PPFP基因致瘤作用的分子机制提供了实验基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王志明	中南大学湘雅医院普通外科	112	1053	18.0	27.0
2	汤参娥	中南大学湘雅医院卫生部肿瘤蛋白质组学重点实验室	42	184	7.0	11.0
3	李萃	中南大学湘雅医院卫生部肿瘤蛋白质组学重点实验室	28	194	8.0	12.0
4	段朝军	中南大学湘雅医院卫生部肿瘤蛋白质组学重点实验室	31	125	6.0	8.0
5	李新营	中南大学湘雅医院普通外科	43	554	11.0	22.0
6	李劲东	中南大学湘雅医院普通外科	37	446	12.0	20.0
7	刘剑鸣	中南大学湘雅医院普通外科	3	19	2.0	3.0