利用重组慢病毒载体建立稳定表达绿色荧光蛋白细胞系

• 作者: 周磊 张敏 张新 徐欣 陈婕
• 来源期刊: 中国临床医学
• 学科: 医学
• 关键词: 慢病毒载体 绿色荧光蛋白 细胞系
• 年，卷（期）: 2009,（2）
• 所属期刊栏目: 其他
• 页码范围: 305-308
• 页数: 4页
• 分类号: R541.3
• 字数: 3174字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1008-6358.2009.02.049

摘要

目的:利用重组慢病毒载体将绿色荧光蛋白基因(GFP)导入293T细胞,建立稳定表达GFP的细胞系,将GFP作为靶基因观察不同方法调节基因表达的效力的差异.方法:以载体质粒pHR'-pCMV-GFP、包装质粒pCMV-ΔR8.2及包膜质粒pCMV-VSVG用磷酸钙共沉淀法共转染包装细胞系293T,收集病毒颗粒再次感染293T细胞,用克隆环筛选出荧光亮度较强的细胞克隆.多次传代后,流式细胞术检测细胞荧光表达的稳定性.同时进行靶向GFP的RNA干扰,观察GFP表达下调情况,验证该细胞系用于研究基因调控方法的有效性.结果:利用重组慢病毒载体可有效建立GFP稳定表达的新细胞系,此细胞系中GFP阳性细胞占99%以上,12次传代前后GFP表达无明显差异;靶向GFP的RNAi可以显著下调GFP表达.结论:成功建立了表达GFP的G4细胞系,并可有效地用于基因调节方法的研究.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	徐欣		52	446	11.0	19.0
2	张新		52	271	9.0	14.0
3	张敏		112	505	11.0	19.0
4	陈婕		13	104	5.0	10.0
5	周磊		48	242	9.0	14.0