pRluc-hKOR-pcDNA3.1 真核重组质粒的构建及在HEK293细胞中的表达

• 作者: 刘有旺 刘海青 李雅林 白波 路海 陈京
• 来源期刊: 中国病理生理杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 受体 阿片样 κ 重组真核表达载体 HEK293细胞
• 年，卷（期）: 2009,（10）
• 所属期刊栏目: 实验技术
• 页码范围: 2078-2080
• 页数: 3页
• 分类号: R331
• 字数: 2759字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-4718.2009.10.044

摘要

目的: 构建与海肾荧光素酶(renilla luciferase,Rluc)融合的人κ型阿片受体(kappa opioid receptor, KOR)的真核表达载体,用于生物发光共振能量转移法检测人KOR与其它受体间的相互作用.方法: 以质粒pcDNA3.1-hKOR为模板,PCR方法扩增人KOR.扩增的人KOR用NotⅠ和XhoⅠ双酶切,同时用这2种酶双酶切质粒pRluc-pcDNA3.1.然后将这2种酶切产物按常规方法连接、转化大肠杆菌Top10.挑取菌落培养,提取质粒,然后进行酶切鉴定,最后进行测序.将测序正确的重组载体用脂质体法转染人胚胎肾(human embryonic kidney 293,HEK293) 细胞,免疫荧光染色,共聚焦显微镜观察.结果: 扩增出了1条约1.2 kb的片段,与预期的人KOR大小相符,质粒酶切结果显示重组质粒 pRluc-hKOR-pcDNA3.1被切成2条片段,其中1条为pRluc-pcDNA3.1载体大小,另1条为目的片段大小.经测序鉴定,序列与GenBank (NM_000912)中的序列高度同源.共聚焦显微镜观察显示,阿片受体主要表达在细胞膜上.结论: 构建成功了pRluc-hKOR-pcDNA3.1重组真核表达载体,此表达载体可用于检测人KOR与其它受体之间的相互作用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李雅林		29	112	6.0	8.0
3	白波		96	380	9.0	12.0
6	刘有旺		16	50	4.0	6.0
7	刘海青		16	76	5.0	8.0
8	陈京		2	5	1.0	2.0
9	路海		2	11	2.0	2.0