通用表达型T载体的构建与真核基因的快速克隆表达

• 作者: 刘朝 卢银平 祝建芳 董继华 郭涛
• 来源期刊: 实用医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 基因表达 表达型T载体 基因克隆
• 年，卷（期）: 2009,（22）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 3740-3742
• 页数: 3页
• 分类号: R3
• 字数: 3033字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1006-5725.2009.22.005

摘要

目的:为简化PCR产物真核表达载体构建步骤,构建真核表达型T载体,并对其特性及表达效率进行分析.方法:限制性内切酶EcoR V酶切真核表达载体pcDNA3,回收线性化质粒片段与dTTP 70℃退火,构成T克隆载体并回收纯化.将增强绿色荧光蛋白基因(EGFP)和中国旱獭a干扰素基因(cwIFNA5)分别扩增后直接克隆到新构建的表达型T载体,转化感受态细菌,挑选阳性菌并制备质粒瞬时转染真核细胞,荧光显微镜观察EGFP的表达,病毒保护试验检测中国旱獭a干扰素的生物学活性.结果:外源基因EGFP和cwIFNA5克隆进该载体后可以进行高效表达,基因转染72 h后,荧光显微镜观察到EGFP基因转染细胞荧光阳性率在80%以上,荧光强度高:病毒保护试验表明cwIFNA5转染细胞培养上清干扰素效价高达1∶600.结论:本研究构建的表达型T载体可用于基因的克隆之外,还可以直接用于基因的高效表达作蛋白质功能分析.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	卢银平	华中科技大学同济医学院附属协和医院病毒研究室	24	93	5.0	7.0
2	董继华	华中科技大学同济医学院附属协和医院病毒研究室	70	396	11.0	16.0
3	刘朝	华中科技大学同济医学院附属协和医院病毒研究室	24	93	6.0	7.0
4	郭涛	华中科技大学同济医学院附属协和医院病毒研究室	61	388	11.0	18.0
5	祝建芳	华中科技大学同济医学院附属协和医院病毒研究室	19	62	4.0	6.0