鸭β-防御素9基因的克隆、组织分布及其原核表达

• 作者: 刘胜旺 廖文艳 韩宗玺 马得莹
• 来源期刊: 中国农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 鸭 AvBD9 组织分布 重组蛋白 抗菌活性
• 年，卷（期）: 2009,（4）
• 所属期刊栏目: 畜牧·资源昆虫
• 页码范围: 1406-1412
• 页数: 7页
• 分类号: S8
• 语种: 中文
• DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2009.04.034

摘要

[目的]从鸭组织中克隆鸭β-防御素9(AvBD9)基因,在原核表达重组鸭AvBD9蛋白;研究重组鸭AvBD9蛋白的体外抗菌活性与理化特性.[方法]采用RT-PCR法,从鸭肝脏组织中扩增鸭AvBD9基因,测定该基因在鸭各组织器官中的分布;将鸭AvBD9基因克隆到大肠杆菌原核表达载体pGEX-6p-1上,构建重组表达质粒pGEX-duck AvBD9,将重组质粒转化大肠杆菌BL21,用IPT6诱导表达;亲和层析纯化蛋白,利用薄层平皿琼脂糖孔穴扩散法测定重组鸭AvBD9蛋白的体外抗菌活性与理化特性.[结果]从鸭肝脏组织中克隆得到鸭AvBD9基因,序列分析表明该基因大小为204 bp,前体肽包括67个氨基酸残基.AvBD9基因在鸭体内广泛分布,SDS-PAGE电泳表明鸭AvBD9基因在大肠杆菌中高效表达,表达的重组鸭AvBD9融合蛋白以包涵体的形式存在,分子量约31 kD.重组鸭AvBD9蛋白对大肠杆菌、多杀性巴氏杆菌、金黄色葡萄球菌、嗜酸乳杆菌、枯草芽胞杆菌有抗菌活性,在-70～100℃或pH 3-10处理30 min后仍有抗多杀性巴氏杆菌作用.[结论]鸭AvBD9基因为204 bp,编码67个氨基酸残基,在鸭组织中广泛分布.重组鸭AvBD9蛋白基因在大肠杆菌中高效表达,该重组蛋白具有广谱的抗菌活性,对温度和酸碱性有较高的稳定性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	马得莹	东北农业大学动物营养研究所	40	967	20.0	30.0
2	刘胜旺	中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室	53	724	15.0	25.0
3	韩宗玺	中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室	9	129	8.0	9.0
4	廖文艳	东北农业大学动物营养研究所	3	76	3.0	3.0