不同引物及数据分析方法对定量PCR结果的影响

• 作者: 刘正霞 徐进梅 徐阳 朱昌亮 杨明夏 马磊
• 来源期刊: 南京医科大学学报（自然科学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 实时荧光定量PCR 2-△△CT法 Pfaffl法 相对标准曲线法 扩增效率
• 年，卷（期）: 2009,（8）
• 所属期刊栏目: 基础医学研究
• 页码范围: 1112-1117
• 页数: 6页
• 分类号: R781
• 语种: 中文

摘要

目的:研究不同引物及数据分析方法对实时荧光定量PCR SYBR Green染料法检测基因表达差异结果分析的影响.方法:通过Primer Express 2.0软件对目的基因CCNDI、C-JUN分别设计4对不同引物进行SYBR Green染料法定量PCR扩增.并分别使用2-△△CT法、Pfaffl法及相对标准曲线法计算肺癌紫杉醇敏感细胞株及耐药细胞株问日的基因的表达差异.分析不同引物和数据计算方法对实验结果的影响.结果:统计学分析表明,引物的扩增效率对定量PCR结果分析有显著影响.不同引物特异性扩增得到的样本间表达倍数有显著差异(P<0.05).3种计算方法中,Pfaffl法与相对标准曲线法无统计学差异(P>0.05),而2-△△CT法与其他2种方法均有显著差异(P<0.05).结论:引物的选择对于定量PCR结果有显著影响;Pfaffl法是更准确,更合理的相对定量计算方法.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	朱昌亮		52	274	9.0	13.0
2	刘正霞		16	12	1.0	3.0
3	马磊		33	176	8.0	11.0
4	徐阳		9	13	3.0	3.0
5	杨明夏		18	53	4.0	6.0
6	徐进梅		2	13	1.0	2.0