抗甲胺磷单链抗体基因的酵母表达及性质鉴定

• 来源期刊: 江西农业学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 巴斯德毕赤酵母 单链抗体 表达 甲胺磷 化学免疫特性
• 年，卷（期）: 2009,（10）
• 所属期刊栏目: 农业生物技术
• 页码范围: 1-4,9
• 页数: 5页
• 分类号: Q819
• 字数: 5210字
• 语种: 中文

摘要

为了构建高效表达阳性抗甲胺磷单链抗体(scFv)基因的巴斯德毕赤酵母Pichia pastoris系统,设计引物扩增阳性克隆scFv基因,亚克隆至表达载体pPICZα C,构建重组酵母表达质粒pPICZα C-scFv,线性化pPICZα C-scFv并高效电转P. pastoris(X-33),抗性梯度筛选转化子以获得高效表达菌株,对获得的菌株先后进行表达条件的优化、优化条件下的诱导表达及单链抗体性质研究.结果:获得了稳定高效表达菌株X-33-Pp-Met-28D4-1,该菌株优化条件下的scFv诱导表达量为25 mg/L,纯化产物对甲胺磷的抑制中浓度IC50为93.52 μg/mL,抗原抗体亲合常数为2.34×10-8 mol/L.因此利用Pichia pastoris表达系统可大量制备功能性抗甲胺磷单链抗体.