小鼠TRAF6基因shRNA真核表达载体的构建与表达

• 作者: 何生松 庞然 董继华 许娟娟 邱荣元 陈锋
• 来源期刊: 世界华人消化杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 肿瘤坏死因子受体相关因子6 RNA干扰 重组表达质粒 短发卡RNA
• 年，卷（期）: 2009,（14）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1406-1411
• 页数: 6页
• 分类号: R3
• 字数: 5551字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-3079.2009.14.006

摘要

目的:构建并筛选肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)短发夹RNA(shRNA)表达质粒.方法:针对小鼠TRAF6 mRNA设计4条理论上最佳的siRNA序列,经退火成互补双链,将相应双链DNA插入pGCsi-U6/GFP/Hygro质粒中,构建重组表达质粒pGCsi-TRAF6 -shRNA1,2,3,4,并以不同比例DNA质粒/脂质体转染重组质粒(1∶2、2∶5、1∶3和1∶4)至RAW 264.7细胞中,观察转染效果.结果:靶向TRAF6 mRNA的4个shRNA重组质粒载体pGCsi-TRAF6 shRNA1,2,3,4,经测序分析,shRNA编码序列与设计的片段完全一致,证实载体构建成功.应用荧光显微镜分析转染效率显示,DNA(g)/脂质体转染重组质粒(L)按1∶2、2∶5、1∶3和1∶4比例转染细胞的效率分别为13.7%±1.2%、24.5%±2.1%、19.3%±1.7%、16.3%±2.8%,以2∶5为最佳比例.只加了脂质体未加质粒(试剂对照)的细胞无荧光表达.结论:TRAF6靶向RNA干扰重组表达质粒构建成功,为进一步研究阻断TRAF6表达对急性肝衰竭过度炎症反应的基因治疗奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	董继华	华中科技大学同济医学院附属协和医院中心实验室	70	396	11.0	16.0
2	陈锋	华中科技大学同济医学院附属协和医院感染科	26	253	9.0	15.0
3	何生松	华中科技大学同济医学院附属协和医院感染科	45	211	8.0	11.0
4	邱荣元	华中科技大学同济医学院附属协和医院感染科	12	73	6.0	8.0
5	庞然	华中科技大学同济医学院附属协和医院感染科	13	83	6.0	8.0
6	许娟娟	华中科技大学同济医学院附属协和医院消化内科	32	157	7.0	11.0