猪LFA-1和CTLA-4实时荧光定量PCR检测方法的建立

• 作者: 孙英健 李焕荣 遇奇 隋丽华
• 来源期刊: 中国农学通报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪 实时荧光定量PCR 检测方法 LFA-1 CTLA-4
• 年，卷（期）: 2009,（21）
• 所属期刊栏目: 畜牧兽医科学
• 页码范围: 13-17
• 页数: 5页
• 分类号: S858.285.3
• 字数: 2990字
• 语种: 中文

摘要

[目的]建立猪LFA-1和CTLA-4实时荧光定量PCR检测方法.[方法]根据GenBank中核苷酸序列设计猪淋巴细胞功能相关抗原-1(LFA-1)和细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(CTLA-4)的特异性引物,经RT-PCR扩增、目的片段与载体连接转化以及重组质粒的鉴定,并对重组质粒标准品和样品cDNA进行检测,构建LFA-1和CTLA-4荧光定量RT-PCR标准曲线.[结果]以1×102～1×109拷贝/μl不同稀释水平的标准品进行荧光定量PCR扩增后,统计学分析显示标准品浓度的对数与Ct值之间存在良好的线性关系(LFA-1:RSq=0.992;CTLA-4:RSq=0.994);样品检测显示LFA-1与CTLA-4引物的扩增曲线图和熔解曲线图的特异性.[结论]所构建的质粒标准品具有线性关系好、重复性好、敏感性高等特点,以及其引物在样品检测中的可应用性,为分析猪免疫细胞在感染病毒前后LFA-1和CTLA-4表达的变化以及评估猪体免疫功能,提供必要的技术平台.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李焕荣	北京农学院动物科学技术系	63	533	10.0	21.0
2	孙英健	北京农学院动物科学技术系	26	233	8.0	15.0
3	遇奇	北京农学院动物科学技术系	5	13	3.0	3.0
4	隋丽华	军事医学科学院实验动物中心	32	203	9.0	13.0