重组人β防御素4的原核表达、纯化及抗铜绿假单胞菌活性初探

• 作者: 伍素华 吴燕 杨成 甘晓琴 罗向东
• 来源期刊: 第三军医大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 抗菌肽 人β防御素4 亲和纯化 铜绿假单胞菌
• 年，卷（期）: 2009,（10）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 883-886
• 页数: 4页
• 分类号: R378.991|R394-33|R977.6
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-5404.2009.10.003

摘要

目的制备原核表达的重组人β防御素4(human beta defensin 4,HBD4),初步探讨其对铜绿假单胞菌的体外抗菌活性.方法将编码HBD4的DNA片段连接到大肠杆菌表达载体pET42a中,构建好的表达质粒pET42a-HBD4转化到表达菌株BL21(DE3)中,0.5 mmol/L IPTG诱导表达4 h,亲和纯化融合蛋白后经Western blot鉴定,再以肠激酶酶切融合蛋白,镍柱亲和层析分离HBD4;采用打孔法初测其抗铜绿假单胞菌活性,并用微量稀释法测定HBD4与3种抗生素的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC),比较其抗铜绿假单胞菌活性并异.结果 GST-HBD4在大肠杆菌中以可溶形式成功表达,纯化的重组HBD4体外对铜绿假单胞菌有抗菌活性,其效能略低于亚胺培南,而高于哌拉和环丙沙星.结论采用基因工程技术成功表达了重组HBD4,其对铜绿假单胞菌有较强的杀菌活性,具有烧伤创面感染治疗的应用前景.