pPIC9K/Ang-1毕氏酵母表达载体的构建及体外表达

• 作者: 刘学政 唐莹 薛一雪 马腾
• 来源期刊: 山东医药
• 学科: 医学
• 关键词: 血管生成因子 克隆 毕氏酵母 基因治疗
• 年，卷（期）: 2009,（41）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 22-24
• 页数: 3页
• 分类号: R34
• 字数: 2359字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-266X.2009.41.008

摘要

目的 构建毕氏酵母表达载体pPIC9K/Ang-1,并进行体外表达研究.方法 从PGEM-T/Ang-1载体中切取目的 片段Ang-1,利用定向克隆到毕氏酵母表达载体pPIC9K中,测序正确后, pPIC9K/Ang-1载体经SalⅠ酶切线形化,以电转化法导入GS115毕氏酵母菌株中,经YPD平板G418抗性筛选后获得Ang-1表达阳性菌株;用SDS-PAGE测定其分子量,用Western Blotting检测发酵上清中Ang-1的抗原性和表达量.结果 成功切取1.5 kb的Ang-1片段,成功构建pPIC9K/Ang-1毕氏酵母表达载体,Blast序列分析与GenBank中AY121504一致.酶切线性化的质粒成功转入GS115毕氏酵母中,诱导表达后SDS-PAGE显示重组人Ang-1分子量约66 kD,Western Blotting证实为人Ang-1.结论 成功构建pPIC9K/Ang-1毕氏酵母表达载体,成功获得稳定分泌Ang-1重组蛋白的基因工程菌株.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	薛一雪	中国医科大学神经生物学教研室	121	520	10.0	15.0
2	刘学政	辽宁医学院解剖教研室	118	564	13.0	17.0
3	唐莹	辽宁中医药大学解剖教研室	34	41	4.0	5.0
4	马腾	中国医科大学神经生物学教研室	23	99	4.0	9.0