寒兰基因组DNA ISSR-PCR反应条件的优化

• 来源期刊: 安徽农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 寒兰 ISSR-PCR反应 遗传多样性
• 年，卷（期）: 2009,（29）
• 所属期刊栏目: 农业生物技术
• 页码范围: 14044-14046,14050
• 页数: 4页
• 分类号: S682.31
• 字数: 3328字
• 语种: 中文

摘要

以改良的CTAB法提取的寒兰(Cymbidium kanran Makino)基因组DNA为模板,通过单因子试验建立最适的寒兰的ISSR-PCR反应体系.结果表明,适宜寒兰ISSR-PCR反应体系的扩增条件为:25 μl PCR 反应体积中,1×PCR buffer,2.0 mmol/L MgCl2,300 ng 模板 DNA,200 μmol/L dNTP,1.40 U Taq DNA 聚合酶,0.4 μmol/L 引物.最佳扩增程序为:94 ℃预变性 5 min,然后进行 40 个循环:94 ℃变性 30 s,复性温度根据各引物的Tm值略低1～2 ℃,30 s,72 ℃延伸 50 s,循环结束后 72 ℃延伸7 min.