O型FMDV复合多表位在毕赤酵母中的表达与鉴定

• 作者: 叶 明 朱战波 李 昌 李 霄 杜寿文 王 婧 王浩然 胡 博 袭 莹 金宁一 韩佳丽 鲁会军
• 来源期刊: 中国兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: O型口蹄疫病毒 毕赤酵母 亚单位疫苗
• 年，卷（期）: 2010,（12）
• 所属期刊栏目: 人兽共患病
• 页码范围: 1634-1637,1641
• 分类号: S852.65 R535
• 语种: 中文

摘要

将O型FMDV复合多表位CTB-TEpi与FMDV结构基因P1-2A（P1/2A）连入毕赤酵母表达载体pPIC9K,经SacⅠ线性化后,利用电转化法整合到毕赤酵母（Pichia pastoris）基因组中。通过G418浓度梯度筛选得到高拷贝阳性转化子GS115/P1/2A-CTB-TEpi。经甲醇诱导表达后,目的蛋白在毕赤酵母中获得成功表达,并在FMDV自裂解片段2A的作用下裂解为P1/2A和CTB-TEpi 2个片段,相对分子质量分别为81 800和39 400,占上清液中可溶蛋白的比例为25%。Western blotting分析表明,表达蛋白的2部分均可被抗O型FMDV的血清所识别,而且含有CTB片段的CTB-TEpi条带可以被兔抗霍乱毒素血清识别,证明表达的蛋白具有抗原活性,为进一步研究O型FMDV复合多表位亚单位疫苗的免疫效果打下了基础。