沉默RANK真核表达载体的构建及有效干扰序列的筛选

• 作者: 丁悦 李卫平 董彬 董文武 许杰 陈炎 马若凡
• 来源期刊: 中华关节外科杂志（电子版）
• 学科: 医学
• 关键词: RANK基因 RNA干扰 小鼠 骨髓 巨噬细胞
• 年，卷（期）: 2010,（5）
• 页码范围: 645-652
• 分类号: R6
• 字数: 3783字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/cma.j.issn.1674-134X.2010.05.013

摘要

目的 构建沉默小鼠RANK基因的真核表达载体 pSuper-shRANK,筛选沉默RANK的最佳干扰序列.方法 针对小鼠RANK基因设计并合成3对干扰序列,将其连接到真核表达载体pSuper上,酶切及测序鉴定正确后命名为pSuper-shRANK,后将其用脂质体瞬时转染小鼠骨髓巨噬细胞,用荧光显微镜观察转染情况,用Real-time PCR和Western blot分析干扰效率.结果 酶切分析与测序结果表明重组载体pSuper-shRANK构建成功,脂质体共转染后,Real-time PCR和Western blot分析结果显示shRANK-3干扰效果最好,干扰效率达88.7%,筛选出shRANK-3为最佳干扰序列.结论 成功构建了沉默小鼠RANK基因的真核表达载体pSuper-shRANK;筛选出了沉默小鼠RANK的最佳干扰序列,为研究抑制该基因在破骨细胞分化及活化作用机制中奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	丁悦	中山大学孙逸仙纪念医院关节外科	99	758	14.0	23.0
2	马若凡	中山大学孙逸仙纪念医院关节外科	98	750	14.0	24.0
3	许杰	中山大学孙逸仙纪念医院关节外科	75	480	12.0	19.0
4	董文武	中山大学孙逸仙纪念医院关节外科	7	61	4.0	7.0
5	陈炎	中山大学孙逸仙纪念医院关节外科	3	7	1.0	2.0
6	李卫平	中山大学孙逸仙纪念医院关节外科	66	334	10.0	15.0