抑癌基因BCSC-1原核表达载体的构建及诱导表达

• 作者: 冯永堂 刘艳菲 王丽娜 袁芳 邸大琳 鞠吉雨
• 来源期刊: 潍坊医学院学报
• 学科: 医学
• 关键词: BCSC-1蛋白 载体构建 原核表达
• 年，卷（期）: 2010,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 41-43
• 页数: 3页
• 分类号: R392.11
• 字数: 2329字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-3101.2010.01.015

摘要

目的 构建BCSC-1基因原核表达载体并进行诱导表达、纯化.方法 PCR方法从腺病毒穿梭载体pDC316-BCSC-1扩增BCSC-1基因,构建原核表达载体ET30a-BCSC-1,转化感受态E.coli BL21(DE3),并用IPTG进行诱导表达.SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳方法检测目的 蛋白的表达,并用超声洗涤方法进行目的 蛋白洗涤纯化.结果 成功构建原核表达载体pET30a-BCSC-1;在IPTG诱导下在E.coli BL21(DE3)中高效表达相对分子质量(Mr)为86 000的重组BCSC-1蛋白,目的 蛋白主要以包涵体的形式存在于沉淀中,经超声洗涤纯化后,重组蛋白纯度可达85%以上.结论 利用构建的原核表达载体成功表达出BCSC-1蛋白,为进一步制备抗BCSC-1的单克隆抗体及在临床中的应用打下良好基础.