人微小RNA-302s表达载体的构建及其对细胞周期的影响

• 作者: 丁利军 刁振宇 孙海翔 胡娅莉 葛秋燕 颜桂军
• 来源期刊: 中国细胞生物学学报
• 关键词: miR-302s PCAF cyclin D1 细胞周期
• 年，卷（期）: 2010,（3）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 370-376
• 页数: 7页
• 语种: 中文

摘要

PCR扩增人血miR-302s的启动子区和编码区,亚克隆至pEGFP-C1载体,构建miR-302s重组表达载体pEGFP-c1-miR-302s.经过测序鉴定该载体含有核心启动子区(TATA)和miR-302s(miR-302a、miR-302a#、miR-302b、miR-302b#、miR-302c、miR-302c#、miR-302d、miR-367和miR-367#簇)的编码子.荧光素酶报告基因实验结果显示pEGFP-C1一miR-302s转染HEK293细胞后抑制细胞周期相关基因cyclin D1和PCAF 3'UTR的活性,提示cyclin D1和PCAF是miR-302s的靶基因.pEGFP-C1-miR-302s转染HEK293细胞后,Real-time Q-PCR检测发现miR-302s高表达,Western blot分析发现cyclin D1和PCAF的表达降低,流式细胞术分析进一步表明细胞转染后细胞周期G1期缩短,S期延长,表明miR-302s对细胞周期G1-s期转换具有重要调节作用.