长双歧杆菌BL0033与BL0034的相互作用研究

• 作者: 何湘 刘大伟 刘威 姜铮 孙忠科 廖祥儒 王雪松 袁静 赵江丽 邵长林 郭燕红 魏晓
• 来源期刊: 军事医学科学院院刊
• 学科: 生物学
• 关键词: GST pull-down BL0033 BL0034 截短突变体 蛋白间相互作用
• 年，卷（期）: 2010,（6）
• 页码范围: 551-555
• 分类号: Q78
• 字数: 4596字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-9960.2010.06.015

摘要

目的 克隆表达B.longum NCC2705果糖ABC转运系统中BL0033、BL0034及其截短突变体,验证两蛋白的体外相互作用,并确定介导彼此相互作用的功能区域.方法 将bl0033与bl0034基因克隆至载体pGEX-4T-1和pET32a并在E.coli中表达,采用谷胱甘肽-Sepharose 4B和镍柱分别对GST和His融合的蛋白进行纯化,GST pull-down验证BL0033与BL0034蛋白之间的相互作用.为了进一步确定BL0033和BL0034的作用位点,根据BL0033和BL0034基序特征构建截短突变体,GST pull-down实验检测截短体与完整蛋白结合的能力,确定介导相互作用的区域.结果 在大肠杆菌中实现了融合蛋白的可溶性表达,经亲和层析获得了融合蛋白.GST pull-down实验证实BL0033与BL0034存在相互作用,其中BL0033的截短体1～23 aa能与BL0034结合,而截短体36～314 aa丧失了与BL0034的结合能力;BL0034的3个截短体中BL0034/8～244 aa、BL0034/33～220 aa能与BL0033相互作用,而BL0034/289～481 aa与BL0033没有作用.结论 证实了BL0033与BL0034之间的相互作用,并确定BL0033的1～23 aa基序与BL0034的33～220 aa基序是这种相互作用的结构域,为进一步研究B.longum NCC2705果糖ABC转运系统的分子机制奠定了理论基础.