长双歧杆菌NCC2705 ATP结合蛋白BL0034表达与活性检测

• 作者: 刘大伟 孙忠科 袁静 郭燕红 黄留玉
• 来源期刊: 军事医学科学院院刊
• 学科: 生物学
• 关键词: 长双歧杆菌NCC2705 BL0034蛋白 表达纯化 ATP结合
• 年，卷（期）: 2010,（6）
• 页码范围: 547-550
• 分类号: Q78
• 字数: 3455字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-9960.2010.06.013

摘要

目的 克隆长双歧杆菌NCC2705中ATP结合蛋白BL0034的基因,利用大肠杆菌表达并纯化GST-BL0034融合蛋白,测定其结合ATP的活性.方法 以长双歧杆菌NCC2705基因组为模板PCR扩增BL0034基因,双酶切后连接到pGEX-4T-1表达载体上,转入大肠杆菌BL21中表达;用谷胱甘肽-Sepharose 4B树脂对可溶性的GST-BL0034融合蛋白进行纯化,并用Western 印迹验证.结果 将BL0034基因克隆至质粒pGEX-4T-1,构建表达载体pGEX-4T-1-BL0034. BL0034经0.05 mmoL/L IPTG诱导,16℃过夜表达,SDS-PAGE可见相对分子质量约为82×103的可溶性表达条带;亲和纯化GST-BL0034,Western 印迹结果为阳性.对纯化后的融合BL0033蛋白结合ATP的能力进行了定量测定,每毫克BL0034蛋白能结合约40 nmol/L ATP.结论 成功克隆了BL0034蛋白的基因,表达并纯化GST-BL0034蛋白,证实了BL0034与ATP具有较强的结合能力,为进一步研究长双歧杆菌NCC2705 BL0034蛋白的功能奠定了基础,为阐明其在果糖ABC转运系统中如何通过水解ATP产生能量提供了前提.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	黄留玉	军事医学科学院疾病预防控制所	86	1108	18.0	30.0
2	孙忠科	军事医学科学院疾病预防控制所	5	24	3.0	4.0
3	袁静	军事医学科学院疾病预防控制所	34	178	7.0	11.0
4	刘大伟	军事医学科学院疾病预防控制所	8	182	4.0	8.0
5	郭燕红	军事医学科学院疾病预防控制所	2	7	1.0	2.0