重组人转化生长因子-β1荧光质粒的构建及转染软骨细胞的基因表达

• 作者: 刘斌 张平 张振山 潘永谦 蔡道章 钟志宏
• 来源期刊: 广州医学院学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 转化生长因子β1 转染 软骨细胞 质粒 基因表达
• 年，卷（期）: 2010,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1-5
• 分类号: Q786
• 字数: 4228字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1008-1836.2010.06.001

摘要

目的:探讨重组人转化生长因子(TGF)-β1荧光质粒的构建及经脂质体转染软骨细胞的表达情况.方法:体外酶消化分离法培养兔关节软骨细胞并采用特异性细胞外基质Ⅱ型胶原免疫细胞染色进行鉴定.双酶切法切取TGF-β1的cDNA片段,通过T4 DNA连接酶连接到pEGFP-C1载体上构建pEGFP-C1-TGF-β1表达质粒.用构建的pEGFP-C1-TGF-β1表达质粒经脂质体转染软骨细胞,在12、24 h、2、4、6 d通过荧光显微镜观察细胞内TGF-β1基因的表达,应用荧光定量PCR检测表达水平.结果:成功分离培养软骨细胞,Ⅱ型胶原免疫细胞染色显示细胞胞质染成棕黄色,胞核基本不着色.pEGFP-C1-TGF-β1真核表达载体质粒成功构建,酶切及测序结果证明表达质粒的DNA序列完全正确.荧光显微镜观察转染后的软骨细胞有绿色荧光蛋白表达,软骨细胞的转染率分别为12 h:(8.22±2.02)%,24 h:(16.54 4±2.91)%,2 d:(14.06±3.67)%,4 d:(14.24±2.62)%,6 d:(12.36±2.28)%.荧光定量PCR检测转染软骨细胞TGF-β1基因拷贝数为16 277±1779,高于未转染软骨细胞的3095±205(P<0.05).结论:构建的TGF-β1荧光质粒可以转染软骨细胞并获得表达,为基因治疗骨性关节炎的研究提供基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘斌	中山大学附属第三医院骨外科	122	778	16.0	21.0
2	蔡道章	中山大学附属第三医院骨外科	161	1403	20.0	27.0
3	张平	广州医学院第三附属医院骨外科	38	464	10.0	21.0
4	钟志宏	广州医学院第三附属医院骨外科	20	269	8.0	16.0
5	潘永谦	广州医学院第三附属医院骨外科	36	413	10.0	19.0
6	张振山	广州医学院第三附属医院骨外科	11	126	6.0	11.0