miR-128真核表达载体的构建及功能的初步研究

• 作者: 夏红飞 崔熠 贺天柱 马旭
• 来源期刊: 生殖医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: miR-128 真核表达载体 U343细胞 细胞增殖 基因表达
• 年，卷（期）: 2010,（2）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 146-151
• 分类号: R3
• 字数: 4662字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-3845.2010.02.016

摘要

目的 构建miR-128真核表达载体,研究其在神经胶质瘤细胞株U343表达及对U343细胞增殖的影响.方法 以人神经胶质瘤细胞株U343的DNA为模板扩增miR-128-1和miR-128-2的前体序列,将人miR-128-1(has-miR128-1)和人miR-128-2(has-miR128-2)基因克隆到真核表达载体pCR3.1,将pCR3.1-miR-128-1(p-128-1)和pCR3.1-miR-128-2(p-128-2)表达载体瞬时转染U343细胞,采用Northern印迹检测成熟的miR-128表达.将U343细胞接种96孔板,MTT法检测过表达miR-128对细胞增殖的影响.结果 p-128-1和p-128-2表达载体经酶切及测序鉴定正确;二者转染细胞后,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增结果显示,其能有效表达miR-128的前体;Northern印迹结果均能产生成熟态的miR-128.MTT检测结果在无血清培养和维甲酸处理的情况下,细胞的增殖能力明显下降.结论 成功构建了p-128-1和p-128-2的真核表达载体,转染神经胶质瘤细胞后能有效表达,miR-128基因过表达能抑制U343细胞的增殖.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	马旭	国家人口计生委科学技术研究所遗传优生中心	84	424	10.0	15.0
2	崔熠	国家人口计生委科学技术研究所遗传优生中心	6	42	4.0	6.0
3	夏红飞	国家人口计生委科学技术研究所遗传优生中心	8	36	4.0	5.0
4	贺天柱	中国农业大学生物学院农业生物技术国家重点实验室	2	11	2.0	2.0