TSLC1真核表达载体的构建及在HepG2肝癌细胞中的表达

• 作者: 张玉成 房学东 肖钟迪
• 来源期刊: 中国体视学与图像分析
• 学科: 生物学
• 关键词: TSLC1 聚合酶链反应 克隆 HepG2
• 年，卷（期）: 2010,（1）
• 所属期刊栏目: 生物医学
• 页码范围: 89-94
• 页数: 6页
• 分类号: Q7822
• 语种: 中文

摘要

目的 构建TSLC1真核表达载体,并转染到肝癌细胞HepG2中使之表达,为研究TSLC1的抗肝癌作用奠定基础.方法 利用RT-PCR技术扩增TSLCl基因全长,并与真核表达载体pRe-ceiver-M29进行连接;应用双酶切、PCR以及测序鉴定此连接载体;脂质体Lipofectamine 2000介导重组载体转染到HepG2细胞中,经G418筛选建立稳定转染细胞株,分别采用RT-PCR和免疫组化法检测其表达.结果 RT-PCR获得了约1 329 bp大小的TSLC1基因片段;经过双酶切、PCR以及测序鉴定证实TSLC1 基因片段正确插入真核表达载体pReceiver-M29中;与对照组比较,RT-PCR方法可见显示转染组细胞TSLClmRNA表达明显增多,免疫组化法可见显示转染组细胞TSLCl 蛋白表达明显增高.结论 成功构建了真核表达载体pReceiver-M29-TSLC1,建立了稳定转染TSLC1的HepG2细胞株.