Fas siRNA真核表达载体构建及其抑制Jurkat细胞凋亡的作用

• 作者: 任东明 柯红 王一羽 王磊
• 来源期刊: 肿瘤防治研究
• 学科: 医学
• 关键词: siRNA Fas 真核表达载体 细胞凋亡
• 年，卷（期）: 2010,（9）
• 页码范围: 979-983
• 分类号: R730.51
• 语种: 中文
• DOI: 10.3971/j.issn.1000-8578.2010.09.002

摘要

目的 构建Fas(CD95)特异性siRNA真核表达载体psilencircle-FasSi,转染Fas-FasL凋亡敏感细胞株Jurkat,研究其抗凋亡作用.方法 通过聚合酶链式反应(PCR)制备siRNA表达框架(SECs),转染Jurkat细胞,实时荧光定量PCR检测Fas tuRNA抑制率,筛选出高效抑制Fas mRNA表达的siRNA;把筛选出的siRNA序列插入siRNA真核表达质粒psilencircle,构建psilencircle-FasSi;psilecircle-FasSi转染Jurkat细胞,实时荧光定量PCR检测Fas tuRNA、Western blot检测Fas蛋白;anti-Fas mAb刺激Jurkat细胞凋亡,流式细胞术检测Jurkat细胞凋亡率.结果 酶切、测序证明成功构建了psilecircle-FasSi,实时荧光定量PCR及Western blot表明psilencircle-FasSi可抑制FasmRNA和蛋白表达,流式细胞术检测证实psilencircle-FasSi可抑制Jurkat凋亡率.结论 我们成功构建了Fas特异性siRNA真核表达栽体psilencircle-FasSi,它不仅可以下调Jurkat细胞的Fas表达而且可以显著抑制Fas-FasL途径诱导的凋亡.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王磊	三峡大学医学院科研办公室	41	131	8.0	10.0
2	任东明	三峡大学医学院科研办公室	30	126	7.0	9.0
3	柯红	葛洲坝中心医院肿瘤科	9	44	3.0	6.0
4	王一羽	三峡大学医学院科研办公室	6	51	3.0	6.0