三位点GSK3β shRNA真核表达质粒的构建及鉴定

• 作者: 卢运萍 宋晓红 王世宣 翁丹卉 邢辉 马丁
• 来源期刊: 肿瘤防治研究
• 学科: 医学
• 关键词: 卵巢癌 shRNA GSK3β
• 年，卷（期）: 2010,（5）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 495-499
• 分类号: R737.31
• 语种: 中文
• DOI: 10.3971/j.issn.1000-8578.2010.05.002

摘要

目的 构建三位点干扰GSK3β基因的高效shRNA表达质粒栽体.方法 用DNA重组技术将针对人GSK3β基因不同部位所设计的3对shRNA序列克隆到高效RNAi真核表达质粒载体pshRNA-U3中,构建shRNA表达栽体pshRNA-U3/GSK3β.脂质体介导转染人卵巢癌细胞株OV2008,流式细胞仪检测转染效率.运用实时定量PCR和Western blot分别检测RNA水平和蛋白水平GSK3β的干扰效果.运用流式细胞仪检测紫杉醇诱导的凋亡率.结果 经测序证实成功构建携带3个GSK3β shRNA的表达载体pshRNA-U3/GSK3β.RT-PCR和Western blotting均证实重组质粒pshRNA-U3/GSK3β转染OV2008后可明显降低细胞内GSK3βmRNA丰度及GSK3β蛋白表达.FACS显示,干扰GSK3β可抵抗紫杉醇诱导的凋亡.结论 成功构建了针对GSK3β的三位点shRNA表达载体pshRNA-U3/GSK3β,并进行了初步的功能效应验证,为进一步研究GSK318蛋白分子的生物学功能及应用奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	卢运萍	华中科技大学同济医学院附属同济医院妇产科	130	1016	16.0	25.0
2	马丁	华中科技大学同济医学院附属同济医院妇产科	193	1145	16.0	23.0
3	王世宣	华中科技大学同济医学院附属同济医院妇产科	131	686	14.0	19.0
4	翁丹卉	华中科技大学同济医学院附属同济医院妇产科	31	135	7.0	9.0
5	邢辉	华中科技大学同济医学院附属襄樊中心医院妇产科	49	438	11.0	18.0