hVEGFA基因重组腺病毒载体的构建及其转染效率的研究

• 作者: 曹侃 李巧玉 李慧勇 袁志诚 陆培松 陈波
• 来源期刊: 江苏大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: hVEGFA基因 腺病毒载体 转染 缺血性脑血管疾病
• 年，卷（期）: 2010,（5）
• 页码范围: 382-385
• 分类号: R34
• 字数: 3306字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-7783.2010.05.004

摘要

目的:应用AdEasy复制缺陷型腺病毒载体系统构建携带hVEGFA基因的重组腺病毒载体.方法:采用分子克隆技术,从PCR2.1-hVEGFA质粒中克隆出hVEGFA基因的编码序列,酶切、连接后,插入腺病毒系统中的穿梭载体pAdTrack-CMV,获得重组质粒pAdTrack-CMV-hVEGFA,将其转化含有腺病毒骨架载体pAdeasy-1的大肠埃希菌BJ5183,进行同源重组,获得重组子pAdeasy-1-hVEGFA.鉴定后,将pAdeasy-1-hVEGFA转染人胚肾细胞(HEK293A细胞),获得含hVEGFA基因的重组腺病毒(rAd-hVEGFA).反复感染HEK293A细胞扩增腺病毒,50%组织培养感染量法(TCID50)检测病毒滴度,荧光显微镜观测绿色荧光蛋白(GFP)的表达.结果:成功构建出含有hVEGFA基因的腺病毒载体rAd-hVEGFA,转染HEK293A细胞后出现绿色荧光蛋白表达,证明腺病毒载体rAd-hVEGFA 转染成功,通过反复感染HEK293A细胞获得大量病毒.结论:成功构建含有hVEGFA基因的腺病毒载体rAd-hVEGFA,可为缺血性脑血管疾病的基因治疗提供基因载体.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李巧玉	江苏大学附属人民医院神经外科	59	214	7.0	12.0
2	袁志诚	江苏大学附属人民医院神经外科	44	148	6.0	10.0
3	陆培松	江苏大学附属人民医院神经外科	36	111	5.0	9.0
4	陈波	江苏大学附属人民医院神经外科	35	109	6.0	9.0
5	曹侃	江苏大学附属人民医院神经外科	6	7	2.0	2.0
6	李慧勇	江苏大学附属人民医院神经外科	3	6	2.0	2.0