耐热、高产重组人Cu,Zn-SOD改构体的构建及纯化方法的研究

• 作者: 万一 张志敏 张月娟 张琨 王琰 马晓迅
• 来源期刊: 西北大学学报（自然科学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 重组人Cu,Zn-SOD 定点突变 纯化 热稳定性
• 年，卷（期）: 2010,（5）
• 页码范围: 837-842
• 分类号: Q78
• 字数: 4253字
• 语种: 中文

摘要

目的 通过对天然人Cu,Zn-SOD基因的改造,得到热稳定性、活性产量提高的重组人Cu,Zn-SOD(rhCu,Zn-SOD)改构体,并进行蛋白纯化方法 的研究.方法 重叠PCR技术将天然hCu,Zn-SOD的Cys6突变为Ala6,Cys111突变为Ser111,构建重组质粒pET22b-rmhCu,Zn-SOD6Ala,111Ser,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导后SDS-PAGE分析改构体蛋白的表达,并进行Western blot鉴定;研究改构体蛋白的纯化方法 ,HPLC检测蛋白纯度,比较rhCu,Zn-SOD及其改构体的活性和热稳定性.结果 成功构建了rmhCu,Zn-SOD6Ala,111Ser表达载体;SDS-PAGE显示rmhCu,Zn-SOD6Ala,111Ser蛋白在BL21(DE3)宿主菌中得到了有效表达,表达量占菌体蛋白总量的64.6%;Western blot结果 显示表达产物可以特异性地与小鼠抗人SOD多克隆抗体结合;纯化得到纯度大于95%的rmhCu,Zn-SOD6Ala,111Se改构体蛋白,从1g湿菌体中获得的活性蛋白总量高于未改构体的2倍;改构体的热稳定性较未改构体获得大幅提高.结论 构建的rmhCu,Zn-SOD6Ala,111Ser改构体具有较好的热稳定性和较高的活性产量,摸索出一种比较简易的蛋白纯化工艺,为Cu,Zn-SOD的广泛应用奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张琨		20	32	3.0	4.0
2	张月娟		12	34	3.0	5.0
3	王琰		17	61	4.0	6.0
4	张志敏		20	75	6.0	7.0
5	马晓迅	西北大学化工学院	59	320	10.0	15.0
6	万一		37	127	7.0	10.0