胚盘下腔注射法将外源质粒pEGFP-N1导入鸡胚的研究

• 作者: 孙研研 徐桂云 曲鲁江 杨宁 蒋斌 郑江霞
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 鸡 胚胎 显微注射 外源质粒
• 年，卷（期）: 2010,（4）
• 页码范围: 760-765
• 分类号: S8
• 字数: 5113字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2010.04.021

摘要

研究运用胚盘下腔注射法将外源质粒pEGFP-N1导入鸡胚,通过检测外源基因表达载体在鸡胚发育过程中的动态代谢、与宿主基因组整合情况,进而对该模式在制备转基因鸡和基因功能研究中的可能性进行探讨.取新鲜鸡胚为实验材料,胚盘下腔注射pEGFP-N1,石蜡膜封口后孵化,于不同时间段采集鸡胚及出雏鸡组织样,PCR方法检测pEGFP-N1的分布及其降解情况.同时,对酶切、回收后的阳性样本基因组用PCR检测了外源质粒与基因组DNA的整合情况.研究结果表明:实验组0.5、1、3、4、5和6日龄鸡胚以及初生雏鸡中均可检测到外源质粒pEGFP-N1上的EGFP基因,阳性率分别为100%、80.00%、66.57%、75.00%、64.29%和84.21%.随着鸡胚的发育,外源质粒会被逐渐代谢掉,出雏时实验组雏鸡的阳性率为75%.但是,阳性样本基因组经HindⅢ酶切后PCR检测结果表明,pEGFP-N1未与宿主染色体产生整合,而是以游离或者多聚状态存在于鸡胚组织中.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨宁	中国农业大学动物科学技术学院	131	1304	21.0	30.0
2	徐桂云	中国农业大学动物科学技术学院	77	599	14.0	21.0
3	郑江霞	中国农业大学动物科学技术学院	42	207	9.0	13.0
4	曲鲁江	中国农业大学动物科学技术学院	37	373	11.0	18.0
5	孙研研	中国农业大学动物科学技术学院	15	61	5.0	6.0
6	蒋斌	中国农业大学动物科学技术学院	3	10	1.0	3.0