普通变形杆菌位置非特异性脂肪酶基因的克隆及在大肠杆菌中的表达

• 作者: 别小妹 卢亚萍 吕凤霞 汤彦翀 陆兆新 顾菁
• 来源期刊: 微生物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: Proteus vulgaris脂肪酶 基因克隆 原核表达 位置非特异性
• 年，卷（期）: 2010,（6）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 755-761
• 分类号: Q936
• 语种: 中文

摘要

[目的]本文拟克隆普通变形杆菌(Proteus vulgaris)脂肪酶基因,并实现其在大肠杆菌中的高效表达,并检验外源表达脂肪酶的催化性质.[方法]通过PCR方法,从P.vulgaris基因组中扩增其脂肪酶基因(PVL),并将其开放读码框区域连接到表达载体pET-DsbA及pMBP-P上,在大肠杆菌中用IPTG诱导表达.我们对培养基组分及培养条件进行优化,以获得最高的酶产量.用Ni柱亲和层析法对所得重组脂肪酶进行纯化,并考察其酶学性质.[结果]PVL基因编码区含864个碱基,编码含287个氨基酸的酶蛋白.该序列在GenBank的登录号为FJ643627.PVL,基因在大肠杆菌BL21内诱导表达的最佳条件为:在pH8.5的LB培养基中添加15 g/L葡萄糖及200 mg/L氨苄青霉素,在培养至OD600为1.2时加入100 mg/L IPTG,15℃诱导15 h,最高酶活达到192.2 U/mL.通过亲和层析纯化了重组脂肪酶,得到一个约31 kDa的蛋白条带.外源表达的脂肪酶的催化特性与野生菌脂肪酶相似,具有催化的位置非特异性,对长链脂肪酸酯亲和性最高.[结论]PVL基因在大肠杆菌中的高效表达为P.vulgaris脂肪酶的进一步研究与应用奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	别小妹	南京农业大学食品科学学院	134	1767	21.0	36.0
2	陆兆新	南京农业大学食品科学学院	253	4353	33.0	53.0
3	吕凤霞	南京农业大学食品科学学院	145	1968	21.0	38.0
4	卢亚萍	南京农业大学生命科学学院	19	127	7.0	11.0
8	汤彦翀	南京农业大学食品科学学院	2	10	2.0	2.0
9	顾菁	南京农业大学生命科学学院	1	3	1.0	1.0