花生RGA-SSCP实验条件的优化

• 作者: 任艳 崔富华 李加纳 李双铃 漆燕 王辉 石延茂 禹山林 袁美
• 来源期刊: 山东农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 花生 RGA-SSCP 优化 分子标记
• 年，卷（期）: 2010,（6）
• 页码范围: 1-4,9
• 分类号: S565.2|Q503
• 字数: 4323字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-4942.2010.06.001

摘要

单链构象多态性(SSCP) 技术是一种简便、灵敏的多态性检测方法,近年在植物研究中得到了较多应用.为了检测花生品种间抗病基因同源序列(RGA)的单核苷酸差异,对影响花生RGA-SSCP的电泳温度、电压、胶浓度、交联度、变性剂等因素进行了优化.结果表明,碱变性后的PCR产物(PCR产物与碱变性剂比例1∶2)在不加甘油的8%非变性聚丙烯酰胺凝胶(交联度为29∶1)、1×TBE电泳缓冲液、恒温4℃和600 V条件下电泳5 h为最佳优化组合.用上述优化方法分析了抗、感北方根结线虫病的亲本及F2群体部分单株,获得了电泳条带细而清晰的SSCP图.该体系的建立对RGA-SSCP标记用于花生基因定位、遗传图谱构建、标记辅助选择等具有重要意义.