猪流感H1N1亚型NP基因杆状病毒表达载体构建及其在昆虫细胞中的表达

• 作者: 叶玲玲 周晓黎 张利仙 徐志斌 段博芳 段纲 艾军 董俊
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: H1N1 NP基因 杆状病毒表达载体 昆虫细胞
• 年，卷（期）: 2010,（12）
• 页码范围: 1118-1122
• 分类号: R373.1
• 字数: 3201字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2010.12.009

摘要

目的 获得研发A型猪流感病毒ELISA检测试剂盒和制备NP蛋白单克隆抗体的抗原物质.方法 根据已报道的猪流感病毒H1N1亚型NP基因序列(GenBank登录号:GQ422386)人工合成NP基因,通过XbaⅠ和EcoRⅠ特异性酶切,将NP基因克隆于昆虫杆状病毒表达载体pFastBacHTB,经PCR、酶切、测序鉴定后,获得携带NP基因的重组质粒pFastBacHTB-NP.该重组质粒转化含有杆状病毒穿梭载体的DH10Bac感受态细胞,经抗生素、PCR筛选,获得转座的杆粒Bacmid-NP.在脂质体介导下转染sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒,再感染细胞,收获目的蛋白.结果 通过SDS-PAGE和Western blotting分析表明该蛋白得到表达,且具有良好的生物活性,大小约为57KD.结论 实验结果表明已成功构建了携带NP基因的重组质粒pFastBacHTB-NP和转座的杆粒Bacmid-NP,转染后在sf9昆虫细胞上成功的表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	艾军		16	113	5.0	10.0
2	段纲		105	483	11.0	18.0
3	周晓黎		33	443	13.0	19.0
4	董俊		26	405	12.0	19.0
5	叶玲玲		10	97	4.0	9.0
6	段博芳		6	10	2.0	3.0
7	张利仙		3	3	1.0	1.0
8	徐志斌		1	1	1.0	1.0