重组腺病毒载体Ad-LMP-1的构建及其转染MSC后成骨活性

• 作者: 刘冬斌 刘尚礼 吴燕峰 沈慧勇 程志安 黄霖
• 来源期刊: 中山大学学报（医学科学版）
• 学科: 医学
• 关键词: LIM-1矿化蛋白 间充质干细胞 成骨活性 基因转染
• 年，卷（期）: 2010,（2）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 199-206
• 分类号: R329.2+8
• 字数: 6985字
• 语种: 中文

摘要

[目的]快速构建大鼠LIM矿化蛋白-1基因重组腺病毒载体,转染MSC,探讨LMP-1基因对MSC成骨分化和成骨活性的影响.[方法]从大鼠成骨细胞内提取总RNA,并设计LMP-1特异性引物进行RT-PCR,获取LMP-1基因后利用Invitrogen公司的TOPO定向克隆技术创建入门克隆pENTR/D-LMP-1.转化TOP10细菌后,挑取阳性克隆摇菌提取质粒,入门克隆再与表达载体pAD/CMV/V5-DEST进行同源重组反应得到病毒载体pAD/CMV/V5-LMP-1.转化细菌后挑选阳性克隆摇菌提取重组病毒质粒,用PacI内切酶线性化后用转染293A细胞后得到重组腺病毒载体.以腺病毒为载体,将大鼠LMP-1基因体外转染于3代大鼠MSC细胞内,检测LMP-1基因在MSC细胞的表达,分别观察转染后实验组与对照组Ⅰ型胶原、碱性磷酸酶、骨钙素表达变化以及骨钙结节的形成情况,评价LMP-1基因的成骨能力.[结果]成功获取大鼠LMP-1基因,入门质粒与病毒表达质粒经过酶切鉴定以及测序验证.LMP-1基闪能在MSC中高效表达.转然后MSC的Ⅰ型胶原,碱性磷酸酶、骨钙素的表达明显增强,骨钙结节形成增多.[结论]利用Gateway技术构建LMP-1重组腺病毒载体相对简单,可快捷获得的pAd-LMP-1.pAd-LMP-1转染MSC后,LMP-1基因能促进MSC向成骨细胞分化,增强其成骨作用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘尚礼	中山大学附属第二医院骨科	207	1649	19.0	31.0
2	吴燕峰	中山大学附属第二医院骨科	65	477	12.0	19.0
3	沈慧勇	中山大学附属第二医院骨科	99	805	14.0	21.0
4	黄霖	中山大学附属第二医院骨科	31	235	8.0	14.0
5	刘冬斌	佛山市南海区人民医院骨科	3	12	2.0	3.0