靶向人血管紧张素原小干扰RNA表达质粒的构建和鉴定

• 作者: 伍丽华 杨汝德
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 血管紧张素系统 血管紧张素原 血管紧张素转换酶 小干扰RNA 构建 质粒
• 年，卷（期）: 2010,（11）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 1951-1954
• 页数: 4页
• 分类号: R318
• 字数: 4181字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2010.11.013

摘要

背景:RNA干扰技术通过将具有一定结构特点、长19～25 bp的双链小干扰RNA导入哺乳动物细胞,特异性降解与其序列具有同源性的mRNA分子,导致目的基因表达抑制.目的:拟构建针对人血管紧张素原mRNA的小干扰RNA表达载体,从而抑制肾素基因在脂肪细胞的表达.方法:从NCBI中查找人血管紧张素原基因全长mRNA序列(NM000029),利用GeneScript公司提供的在线小干扰RNA模板序列设计软件,自行设计靶向血管紧张素原的两条shRNA的DNA模板单链,合成靶向血管紧张素原基因转录可形成茎环结构的寡聚核苷酸,退火后与酶切后的psiRNAT-U6.1/Neo质粒连接,在TOP10菌株中扩增,并测序鉴定.结果与结论:将含有血管紧张素原-mRNA目标序列19 bp的双链DNA插入片段,连接到pRNAT-U6.1/Neo质粒形成重组质粒.EcoR Ⅰ和Hind Ⅲ双酶切后,空载体得到351 bp小片段,而人重组质粒得到397 bp小片段,与预期相符.EcoRI和Kpv Ⅰ双酶切后,空载体得到1条345 bp小片段,而人重组载体没有得到小片段条带,与预期相符.测序结果表明psiRNAT-U6.1/Neo质粒已经插入人脂肪细胞的干扰合成片段,无碱基突变,成功构建了靶向血管紧张素原-小干扰RNA表达载体.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨汝德	华南理工大学生物科学与工程学院	94	1230	20.0	31.0
2	伍丽华	华南理工大学生物科学与工程学院	3	2	1.0	1.0