靶向DNA甲基转移酶1的siRNA表达载体的构建与筛选

• 作者: 刘红涛 姜国忠 孙亚兰 孟志英 赵先兰 饶燕玲
• 来源期刊: 郑州大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: DNA甲基转移酶1 RNA干扰 HeLa细胞 构建 载体 筛选
• 年，卷（期）: 2010,（4）
• 页码范围: 600-603
• 分类号: R730.5
• 字数: 3013字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-6825.2010.04.022

摘要

目的:构建针对DNA甲基转移酶(dnmt1)基因的小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)表达载体,以用于后续的RNA干扰研究.方法:针对人dnmt1的mRNA序列,设计并合成6条编码siRNA的寡核苷酸片段,经退火成互补双链,克隆至载体pSilencer3.1-H1中构建3个重组体,分别命名为pshRNA-dnmt1-A、pshRNA-dnmt1-B和pshRNA-dnmt1-C.并进行测序鉴定.再利用无内毒素的大提质粒试剂盒制备无内毒素的pshRNA-dnmt1-A、B和C,分别通过脂质体介导转染宫颈癌HeLa细胞,以未转染和转染空载体者为对照.采用RT-PCR和Western blot检测转染细胞dnmt1 mRNA及蛋白表达情况.结果:成功构建了表达靶向dnmt1的siRNA重组载体;转染pshRNA-dnmt1-C对HeLa细胞dnmt1基因的表达几乎尤影响.pshRNA-dnmt1-A、B均能有效沉默HeLa细胞中dnmt1基因的表达,其dnmt1 mRNA表达的抑制率分别为21.8%和69.7%,蛋白表达的抑制率分别为27.9%和73.2%.以pshRNA-dnmt1-B的十扰效果最佳.结论:成功构建并筛选出了有效的dnmt1 siRNA表达载体.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘红涛	郑州大学生物工程系	60	431	11.0	18.0
2	姜国忠	郑州大学基础医学院病理学教研室	35	208	8.0	13.0
3	赵先兰	郑州大学第一附属医院妇产科	95	543	13.0	20.0
4	孟志英	郑州大学第一附属医院妇产科	8	46	3.0	6.0
5	饶燕玲	郑州大学第一附属医院妇产科	5	18	3.0	4.0
6	孙亚兰	郑州大学第一附属医院妇产科	4	17	1.0	4.0